細胞調製
通常の細胞は1〜3×107 cells/ml 程度に調製してください。
サイズの大きい細胞（癌細胞等セルライン、付着系細胞、iPS細胞等）は、
5×106 cells/ml程度に調製してください。
場合により希釈する場合もありますので、medium等を余分にお持ちください。
2. Filtration
ソーティング、解析の前にサンプルを40-50μmナイロンメッシュフィルターに
必ず通してください。これはノズルの詰まりを避けるためです。
付着性の高い細胞の場合、sorting中に再度フィルターをかけることがあります。
3. 回収容器の準備
ソートする細胞を回収する容器をご準備ください。
得られる細胞数、あるいはソート後の細胞で何を行うかによりますが、1.5ml E.tube、
5ml FALCON Tube、15ml コニカルチューブ、6〜384well plate などを使用します。
チューブはポリプロピレン素材の方が、回収細胞の壁への付着が低く、回収率が向上します。
また、FCSやFBSのような血清によるコーティングも付着を抑えます。
回収容器には予めメディウム等を容器の1/2〜1/3程度加えてください。
4. 細胞回収にかかる時間
上記の細胞濃度でサンプルを調製した場合、1秒間に5,000〜25,000 cells、
1時間で1.8×107〜5.4×107 cellsを処理することが可能です（細胞種によって異なります）。
純度はどの速度でもほぼ変わりませんが（98%以上）、回収率は高速になるにしたがい低下します。
持ち込まれた細胞数、目的細胞の回収希望数などで処理速度を決めています。
5. 低頻度の細胞
頻度の極めて低い細胞のソーティングやマルチカラー解析などを行う際には、磁気ビーズ法による
pre-depletionや抗体と蛍光色素のパネル選択など、事前検討が重要です。
スタッフにご相談ください。
蛍光色素
発現レベルの弱い分子には、明るい蛍光色素標識のものを使用してください。| Relative Brightness | ||||
| Laser | Very Bright | Bright | Moderate | Dim |
| UV 355nm |
BUV737 |
BUV395 |
||
| Violet 405nm |
BV421 BV650 BV711 |
BV605 BV786 |
BV510 | V450 V500 |
| Blue 488nm |
BB515 PE-CF594 PE-Cy5 |
PE PE-Cy7 |
FITC Alexa488 PerCP-Cy5.5 |
PerCP |
| Red 640nm |
APC Alexa647 |
Alexa700 APC-H7 APC-Cy7 |
||
BV : Brilliant Violet
BB : Brilliant Blue
Alexa : Alexa Fluor
出展：Becton, Dickinson and Company（一部改変）